Laccaser er blå multi-kobberoxidaser, der katalyserer reduktionen af dioxygen til vand under samtidig reduktion af mange forskellige organiske og uorganiske forbindelser. Laccaser er extracellulære enzymer bestående af 520-600 aminosyrer, hvoraf et N-terminal signalpeptid udgør ca. 20 aminosyrer. Molvægten for svampelaccase ligger fra 65 til 85 kDa og for Rhus laccaser (trælaccase) lidt højere, idet den er stærkt glycosyleret. Enzymerne har vist sig at have mange anvendelsesmuligheder i industrien. Der arbejdes der i samarbejde med Novozymes på at optimere disse enzymers egenskaber ved kloning

Projektet omhandler praktisk anvendelse af proteinkemiske metoder til oprensning af klonet laccase fra bl.a. M. thermophila (MtL) udtrykt i en skimmelsvamp (Aspergillus oryzae).  Dette tænkes gjort ved brug af forskellige kromatografiske teknikker såsom ionbytning, hydrofob interaktion og størrelsesseparation udført på FPLC system. Renhed af det oprensede enzym kunne f.eks vises ved brug af SDS-PAGE.

Det oprensede enzym skal karakteriseres ved bestemmelse af specifik aktivitet, pH-optimum, metalbestemmelser (kobber til laccase forhold) samt eventuelt bestemmelse af isoelektriske punkt (pI). Kinetiske parametre for den oprensede MtL kan endvidere bestemmes under omsætning af udvalgte substrater ved hjælp af oxygen elektrode. Endelig kan MtL karakteriseres spektroskopisk ved hjælp af UV-Vis spektroskopi og cirkulær dichroisme.

Projektet vil indeholde elementer af bioinformatik f. eks sekvens sammenligning af laccaser fra forskellige organismer (alignment og fylogeni) og foldninger af sekvensen for MtL efter kendte 3D-strukturer af laccaser fra andre organismer (homologifoldninger).

Morten J. Bjerrum ()